甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶基因(secda 5)的原核表达及多克隆抗体制备

[目的]几丁质脱乙酰酶(Chitin deacetylase,CDA,EC 3.5.1.41)是昆虫几丁质代谢中的一种关键酶,在昆虫生长、发育和代谢中具有重要作用.本研究旨在克隆甜菜夜蛾secda5基因,对其进行原核表达,同时制备其蛋白的多克隆抗体.[方法]以pMD19-T-secda5重组质粒为模板,通过PCR技术获得编码甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)中肠几丁质脱乙酰酶secda5全长基因,连接pET-28a载体并转化E.coli BL21 (DE3)构建工程菌.以不同IPTG浓度、培养温度对目的蛋白进行诱导表达.[结果]IPTG终浓度为0.50 mmol/L、37℃诱导培养4h时蛋白表达量最高.诱导表达获得的重组蛋白经纯化后制备多克隆抗体.[结论]此研究成功克隆了甜菜夜蛾secda 5基因,并进行了原核表达以及多克隆抗体的制备.     

移植骨髓间充质干细胞对乳腺炎模型大鼠血清中酶及抗体水平的影响

试验旨在研究乳房基底部移植骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对乳腺炎大鼠血清中髓过氧化物酶(plup peroxidase,MPO)、乳过氧化氢酶(milk catalase,LP)及免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)的影响。从70只SD正常雌性大鼠中随机选取5只,于产后72 h,即试验-1 d屠宰,作为正常对照,同时其余65只参照国内常用建立乳头管灌注内毒素的方法,从大鼠乳房基底部注入0.05 mL(50 μg)内毒素。乳腺炎模型建立成功1 d后,即试验0 d,随机选5只屠宰作为对照,同时将其余60只随机分为3组,即对照组(乳房基底部注射生理盐水50 μL)、抗生素组(乳房基底部注射抗生素50 μL(5000 U/侧))和移植BMSCs组(乳房基底部移植BMSCs 50 μL(1×10⁶个)),每组20只,于试验1、3、5和7 d各组分别屠宰5只,所有屠宰大鼠从心脏处采血制备血清,送检血清中MPO、LP、IgM、IgA和IgG含量。结果表明,治疗后各时间点移植BMSCs组血清中MPO含量均显著低于对照组(P<0.05),1和7 d时LP含量显著低于对照组(P<0.05)。1和5 d时移植BMSCs组IgA、IgG和IgM含量均显著高于对照组(P<0.05),7 d时IgG和IgM含量显著高于对照组(P<0.05),1和7 d时IgG含量、3和5 d时IgA含量及5 d时IgM含量均与抗生素组差异显著(P<0.05)。因此,BMSCs和抗生素都能降低乳腺炎大鼠血清中MPO和LP含量,提高IgM、IgA和IgG含量,且移植BMSCs组对抗体的总体作用效果比抗生素组显著。     

犬瘟热病毒免疫蛋鸡血清抗体与卵黄抗体消长规律的研究

试验旨在了解产蛋鸡对犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)抗原的免疫反应及其血清抗体和卵黄抗体的消长规律,为制备卵黄抗体提供依据。将CDV接种Vero细胞和DF1细胞进行传代并测定其病毒滴度,选取细胞病变出现早、病毒滴度高的Vero细胞毒作为接种病毒抗原免疫蛋鸡。每10 d免疫蛋鸡1次,第4次免疫后每30 d加强免疫1次。免疫前及免疫后每10 d采血分离血清,每5 d收集鸡蛋提取卵黄抗体,用琼脂扩散法和间接ELISA法测定其抗体水平。结果显示,血清抗体比卵黄抗体的滴度高,两者呈正相关性,卵黄抗体出现较血清抗体迟3~5 d,卵黄抗体在第3次免疫后3~5 d就已达到较高水平,此时即可开始收集鸡蛋制备卵黄抗体。     

松材线虫类毒过敏原蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

 利用重叠延伸PCR基因合成法,按大肠杆菌偏爱密码子,合成松材线虫类毒过敏原蛋白基因（Bxvap2）,将其连接到原核表达载体pET-29b(+)上。获得的重组子转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析表明,目的蛋白以可溶形式高效表达,占细菌总蛋白的33.5 %。将表达产物经Ni-NTA亲和柱纯化后进行质谱分析,结果显示纯化的蛋白为BXVAP2蛋白。用制备的BXVAP2蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,间接ELISA测得抗体灵敏度5.4 ng·mL^-1（效价为1∶1 360 000）,为进一步研究该蛋白的组织定位及功能,明确该基因在致病过程中的作用机理奠定了基础。     

Impact of Sump Tank Size on Growth,Survival, and Production of Marron,Cherax tenuimanus,in an Intensive System

Juvenile marron, Cherax tenuimanus were cultured in an intensive crayfish culture system for a period of six months to study the effects of sump tank size on crayfish growth, survival, and production. Water volume in the large sump system was 2750 L and in the small sump tank system was 500 L. Crayfish were held in individual compartments (surface area 320 cm², depth 10 cm) and fed with commercial pellets (30% protein; 3-5% body weight per week). Specific growth rate (SGR) was 0.75%/day in the large sump system and 0.68%/day in the small sump system; survival was 83% in the large sump system and 71% in the small sump system; and biomass roduction (B) was 239 g/m² in the large sump system and 158 g/m² in the small sump system. These values were all higher (P < 0.05) in the large sump system. The results suggest that crayfish production could be improved by using large sump tanks in recirculating intensive crayfish culture systems.     

采用双峰驼重链抗体特异的抗血清检测不同抗原免疫骆驼过程中血清重链抗体的水平

为了探究重链抗体在骆驼免疫保护中的生物学作用,本研究利用Protein G和Protein A亲和层析纯化新疆双峰驼血清中总IgG和重链抗体IgG2,并免疫昆明小白鼠制备抗双峰驼总IgG和抗双峰驼重链抗体IgG2的多抗血清;通过ELISA检测双峰驼在体液免疫应答过程中针对spaA-N、溶菌酶和蒜氨酸酶3种抗原的重链抗体的滴度变化。结果从新疆双峰驼血清中亲和层析纯化出天然重链抗体IgG2,蛋白质分子质量约为46 ku;免疫昆明小白鼠后获得抗双峰驼总IgG多抗血清的效价为1∶204800,抗双峰驼重链抗体IgG2多抗血清的效价为1∶6400。在spaA-N免疫骆驼诱导的体液免疫应答过程中,重链抗体IgG2出现延迟反应。3种蛋白均能诱导抗原特异的IgG2亚类重链抗体的产生。     

猪唾液酸黏附素氨基端结构域基因的克隆表达及其多克隆抗体制备

本试验旨在克隆出猪唾液酸黏附素的近氨基端结构域基因,进而构建原核表达载体并诱导表达重组蛋白,以制备多克隆抗体。试验中应用RT-PCR技术从健康仔猪肺巨噬细胞中克隆出猪唾液酸黏附素的近氨基端结构域的cDNA序列,并将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-Sn150,成功表达了分子质量大小约为43.1 ku的γ亚单位重组蛋白。将重组蛋白pET-Sn150免疫小鼠,制备获得鼠抗pET-Sn150重组蛋白多克隆抗体,将得到的重组蛋白多克隆抗体采用间接 ELISA 和Western blotting试验方法检测,ELISA测定多克隆抗体的血清效价为1∶12800;Western blotting试验结果证明,制备的鼠抗pET-Sn150多克隆抗体可以与重组蛋白进行特异性结合,从而证明重组蛋白具有较好的免疫原性。本试验克隆出猪唾液酸黏附素的近氨基端结构域基因并成功表达,为进一步研究其结构与功能奠定了基础。     

猪IL-15多克隆抗体的制备及其生物活性的检测

猪IL-15与人IL-15具有较高的相似率,为进一步研究其生物活性,本研究将去除信号肽的猪IL-15克隆至原核表达载体pET-30a,并成功获得其重组蛋白。将纯化的重组蛋白用于多克隆抗体的制备,并利用琼脂扩散方法、ELISA方法、Western blotting试验及免疫荧光试验对其抗体效价、特异性、灵敏度等生物活性进行了检测。结果表明,该抗体具有较高的抗体效价和很好的特异性,可以作为IL-15特异性抗体用于今后的试验研究。     

Adjuvant Activity of Sargassum pallidum Polysaccharides against Combined Newcastle Disease,Infectious Bronchitis and Avian Influenza Inactivated Vaccines

This study evaluates the effects of Sargassum pallidum polysaccharides (SPP) on the immune responses in a chicken model. The adjuvanticity of Sargassum pallidum polysaccharides in Newcastle disease (ND), infectious bronchitis (IB) and avian influenza (AI) was investigated by examining the antibody titers and lymphocyte proliferation following immunization in chickens. The chickens were administrated combined ND, IB and AI inactivated vaccines containing SPP at 10, 30 and 50 mg/mL, using an oil adjuvant vaccine as a control. The ND, IB and AI antibody titers and the lymphocyte proliferation were enhanced at 30 mg/mL SPP. In conclusion, an appropriate dose of SPP may be a safe and efficacious immune stimulator candidate that is suitable for vaccines to produce early and persistent prophylaxis.     

水稻草状矮缩病毒P2基因多克隆抗体的制备及应用

为了进行水稻草状矮缩病毒(Rice grassy stunt virus, RGSV)诊断方法和蛋白功能研究。通过RT-PCR方法从感染RGSV的水稻中克隆该病毒的P2基因,并将此基因片段重组到原核表达载体pDEST17上。将重组载体转化E. coli Rosetta,经IPTG诱导后获得分子量约为29 kDa含HIS标签的融合蛋白。以诱导的融合蛋白为抗原,免疫新西兰大耳白兔获得多克隆抗体,经酶联免疫检测发现其效价达到l:8192。并用制备的抗体建立了特异、灵敏的检测RGSV的IC-RT-PCR和Dot-blot ELISA方法,为该病毒的检测、诊断提供了保障,同时也为P2蛋白的结构和功能研究奠定了基础。